学 分：3
实验学时：48
一、课程性质与教学目标
专业应用，选修课
二、基本要求
1. 必须在实验操作前掌握课堂所学的理论知识，作好实验指导的预习，明确实验的目的要求。
2. 充分发挥个人的主观能动性，态度严肃认真，亲手操作，掌握各种仪器的使用。
3. 独立思考，分析研究，在规定的时间内按要求、细致准确地作好作业。作业不合格者，必须重作。
4. 注意分子生物学实验操作安全。
三、主要教学方法
讲授、演示、实际操作
四、实验教学内容
实验一：分子生物学实验安全及分子生物学实验常用仪器设备
【实验类型】验证性
【实验学时】6学时
【实验目的】
1.了解分子生物学实验安全注意事项；
2.学习分子生物学实验室所需要的仪器设备、些常用精密仪器的使用方 法；
【实验基本要求】
（1）了解分子生物学实验安全注意事项；
（2）掌握微量移液器、旋涡混合器和冷冻离心机、电泳的使用方法。
【主要仪器设备名称及规格、型号】
离心机、冷冻设备、天平、移液器、吸头、PCR 仪、纯水仪、旋涡混合器等；凝胶电泳胶块。
实验二：生物信息学数据库
【实验类型】综合性
【实验学时】8学时
【实验目的】
1. 学会利用核酸序列数据库搜索序列并理解序列格式的意义
【实验内容摘要】
1.国际权威核酸序列数据库介绍
2.检索生物序列并分析序列特征
【实验基本要求】
（1）学会利用所学的数据库检索方法获得一段DNA序列 (基因或 mRNA)，；
（2）写出序列名称、登录号 (accession )、序列特点 (CDS, 外显子等)理解蛋白质的两性解离性质。
【主要仪器设备名称及规格、型号】
多媒体计算机，网络连接设备。
实验三：动物基因组DNA的提取及质量检测
【实验类型】综合性
【实验学时】5学时
【实验目的】
1. 掌握提取真核生物基因组DNA提取的原理和步骤；
2. 熟练地进行真核生物基因组DNA的提取操作；
3. 掌握对提取的DNA样品进行质量检测的方法。
【实验内容摘要】
1. 动物基因组DNA的提取；
2. DNA质量检测。
【实验基本要求】
1. 掌握真核生物基因组DNA的提取操作的方法；
2. 学会一种对提取的DNA样品进行质量检测的方法；
【主要仪器设备名称及规格、型号】
电热恒温干燥箱（烘箱）、低温离心机、移液（10,20,200,1000μl）、枪头、1ml离心管（灭菌）、吸头（灭菌）、高压灭菌锅、冰箱，紫外分光光度计。
实验四：目的基因的PCR扩增
【实验类型】综合性
【实验学时】5学时
【实验目的】
1. 学习根据不同物种进行PCR体系设计；
2. 掌握PCR扩增的原理和操作步骤。
【实验内容摘要】
1. PCR体系设计；
2. PCR产物扩增。
【实验基本要求】
1. 掌握常规PCR仪器的使用方法；
2. 学会PCR扩增体系设计、参数设置的基本能力。
【主要仪器设备名称及规格、型号】
PCR扩增仪、微量移液器（2,10,20,200,1000μl）、枪头、磁力搅拌器、台式高速离心机、微量低速离心机。
实验五：PCR产物的琼脂糖凝胶检测
【实验类型】综合性
【实验学时】4学时
【实验目的】
1. 了解利用琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物的原理；
2. 掌握琼脂糖凝胶电泳仪及凝胶电泳成像系统的操作步骤。
【实验内容摘要】
1.琼脂糖凝胶的制作；
2.电泳上样操作与电泳；
3.凝胶电泳成像系统上检测。
【实验基本要求】
掌握PCR扩增产物检测方法；
【主要仪器设备名称及规格、型号】
水平式电泳槽、电泳仪、凝胶成像系统、胶带、微炉、微量移液器。
实验六：总RNA的提取及质量检测
【实验类型】综合性
【实验学时】12学时
【实验目的】
1.掌握动物组织的采样及研磨方法
2.掌握提取真核生物RNA的原理和步骤；
3.熟练地进行真核生物RNA的提取操作；
4.掌握对提取的RNA样品进行质量检测的方法
【实验内容摘要】
1.解刨动物，收集组织；
2.液氮急速冷冻组织样品；
3.在低温条件下研磨组织;
4.磨样后-80℃保存样品备用；
5.样品加入Trizol试剂；
6.离心除不溶性物质；
7. 相分离；
8. 氯仿再次去杂；
9.清洗RNA；
10.RNA的溶解；
11.检测RNA条带。
【实验基本要求】
掌握动物组织研磨方法；
掌握总RNA的提取方法；
掌握RNA质量检测方法。
【主要仪器设备名称及规格、型号】
低温离心机、微量移液器吸头（灭菌）、高压灭菌锅、冰箱、超净工作台、水平式电泳槽、电泳仪、凝胶成像系统。
实验七：大肠杆菌质粒DNA的小量提取及酶切
【实验类型】综合性
【实验学时】8学时
【实验目的】
1. 了解利用碱裂解法提取质粒DNA的原理；
2. 掌握质粒DNA提取的操作步骤。
【实验内容摘要】
1.扩大培养含pUC19质粒的大肠杆菌；
2.利用碱裂解法提取质粒DNA；
3.质粒DNA的酶切。
【实验基本要求】
1. 掌握质粒DNA提取的方法；
2. 学会质粒DNA的酶切技术。
【主要仪器设备名称及规格、型号】
恒温摇床、冷冻离心机、移液枪一套、制冰机、三角瓶、 Eppendorf管、试管、培养皿、试剂瓶、超净工作台、37℃恒温培养箱、恒温水浴锅。
五、考核方式
考核类型：考查
考核形式：闭卷
六、主要参考资料
1、《分子生物学实验》，李钧敏，浙江大学出版社，2013年；
2、《分子生物学实验指导》，魏群，北京师范大学出版社，2004年；
3、《基础分子生物学实验指导》, 卢亚萍， 高等教育出版社，2015年。
